胚胎干细胞的培养体系综述

维普资讯 http://www.cqvip.com 广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２００２，９（４）：３０２～３０５，３１１　胚胎干细胞的培养体系综述　Ｏｎ　Ｃｕｌ　ｔｕｒｅ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌ　ｌ　ｓ　蒙超衡　黎宗强　梁明振　Ｍｅｎｇ　Ｃｈａｏｈｅｎｇ　Ｌｉ　Ｚｏｎｇｑｉａｎｇ　Ｌｉａｎｇ　Ｍｉｎｇｚｈｅｎ　（广西大学动物繁殖研究所南宁市秀灵路１３号　５３０００５）　（Ａｎｉｍａｌ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１３　Ｘｉｕｌｉｎｇｌｕ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３０００５，Ｃｈｉｎａ）　摘要　综述胚胎干细胞培养基、有饲养层培养体系和无饲养层培养体系的主要成分，以及无血清胚胎干细胞培　养基。　关键词　胚胎干细胞　培养体系　培养基　中图法分类号Ｑ８１３．７　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｆｏｒ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ（ＥＳ）ｃｅｌｌｓ，ｔｗｏ　ｍａｊｏｒ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｗｉｔｈ　ｆｅｅｄｉｎｇ　ｌａｙｅｒ　ａｎｄ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｆｅｅｄｉｎｇ　ｌａｙｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｒｍ—ｆｒｅｅ　ＥＳ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｒｅ　ｒｅｖｉｅｗｅｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ，ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍ，ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　胚胎干细胞（ＥＳ细胞）是来源于植入前胚泡的内　细胞团的细胞（ＩＣＭ）ｌ１　和原始生殖细胞（ＰＧＣｓ）Ｅ３］，　它既可分裂增殖为与之相同的保持全能性的细胞，又　能分化为分化潜能更小的细胞。如培养于含有白血病　抑制因子（ＬＩＦ）的培养基中，可保持增殖而不分化　］。　ＥＳ细胞的培养条件关键是既要维持细胞的未分　数ＥＳ细胞系则介于二者之间。不同的ＥＳ细胞系具　有不完全相同的特征和营养要求，故每个ＥＳ细胞系　都应建立适合其生长的最佳条件，维持一个ＥＳ细胞　系的条件不能用于另一个细胞系　。所以，有必要对　干细胞的培养体系做一综述。　化状态和潜能性，又要使其无限增殖。细胞培养能否　ｌ培养基的主要组成　ＥＳ细胞培养液的组成是在基础培养基上添加血　达到目的，选择合适的培养体系是关键，一般是根据　文献及个人的经验提出设计，再通过一系列的实验进　行确认　］。胚胎干细胞的培养成功与否，可以通过细　清、Ｉ　ＩＦ、　巯基乙醇，Ｌ一谷氨酰胺等成分　，并使用饲　养层细胞或条件培养基（ＣＭ）。　常用的基础培养基为含高糖（４　５００　ｍｇ／Ｌ）和谷　氨酰胺的ＤＭＥＭ　。由于ＥＳ细胞来源于分裂增殖　非常活跃的早期胚胎细胞，维持其生长代谢所需的营　胞集落的形态、二倍体核型检查、能否形成嵌合体动　物等方法进行检验　。　国内外学者已相继建立了大鼠ｌ７］、小鼠一　、　猪。、牛［Ｉ　ｏ－，还有鸡、兔、金黄地鼠、灵长类等多种动　物的ＥＳ细胞系　。但国内的ＥＳ细胞的建系和培养　养要充足。高糖的ＤＭＥＭ可以提高ＥＳ细胞的增殖　速度，同时又能提供饲养层细胞生长所需的能量。ＥＳ　过程中仍存在着建系率低、培养的细胞中正常核型的　细胞对谷氨酰胺要求较高，它是细胞合成蛋白质与核　酸所必需的，由于谷氨酰胺在溶液中易分解，所以使　用前须重新加入。』３一巯基乙醇除了对胚胎细胞的分裂　增殖有促进作用外，还可还原血清中的含硫化合物，　防止过氧化物对ＥＳ细胞的损害。　添加的血清为胎牛血清（ＦＣＳ）和小牛血清。血清　含有丰富的营养成分，在促进ＥＳ细胞增殖方面起到　比率低及能形成嵌合体的细胞系比率低等问题　。。　由于不同种类动物的ＥＳ细胞以及同种不同品　系动物的ＥＳ细胞的体外培养条件具有明显差异性，　如有的ＥＳ细胞系极易分化，二倍体核型也很难维　持；有的则很不容易分化，二倍体核型容易维持；大多　很好的作用，并对ＥＳ细胞的贴壁生长、集落形态有　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｖｏ１．９　Ｎｏ．４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２００２　维普资讯 http://www.cqvip.com 重大影响。此外它可能含有一些未知的促ＥＳ细胞分　化的因子，也可能含有微量的血红蛋白和内毒素，会　干扰ＥＳ细胞的生长。但高浓度的血清并不利于ＥＳ　细胞生长。　牛类ＥＳ细胞卫　。ＰＭＥＦ对ＥＳ细胞分化的抑制作用　可能来源于它们产生的Ｉ　ＩＦ～！　。　大多数实验室均采用ＰＭＥＦ作为饲养层分离培　养ＥＳ细胞　，ＰＭＥＦ多来源于１４．５　ｄ孕鼠，如以１０　不同批次的血清对促进ＥＳ细胞生长具有不同　的效果。每个ＥＳ细胞系依赖于建系时所用的血清批　次，若更换血清，则应以该细胞系为供试细胞，在含有　待测血清的培养基上进行传代培养（８～１０代）和克　隆测试，测试合格的血清只适用于该细胞系，若用于　其它ＥＳ细胞系，则仍可能出现不同的效果。故建系　和维持ＥＳ细胞生长所用血清应为同一批次一　。　ｄ、１８　ｄ的ＰＭＥＦ制作的饲养层，ＥＳ细胞亦能生长良　好，并保持未分化状态ｌ！　。在使用前，可用放射线～　或丝裂霉素一Ｃ处理２　ｈ或９０　ｒａｉｎ一　一使ＰＭＥＦ失去　分裂活性。　用１～３代的ＰＭＥＦ培养ＥＳ细胞时，可以理想　地维持其未分化状态，并在一定代次内维持其二倍体　核型一　一。随着传代次数增多，ＰＭＥＦ产生抑制分化因　子和促增殖因子的能力会减弱甚至丧失一　！。反复制　备ＰＭＥＦ会增大培养的工作量。目前这一缺陷可通　需添加其它的细胞生长促进因子有干细胞因子　（ＳＣＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）等　。　ＳＣＦ和ｂＦＧＦ对ＥＳ细胞生长起促进作用，但也有人　认为ｂＦＧＦ和ＳＣＦ对ＥＳ细胞生长无协同作用，在有　膜结合形式的ＳＣＦ存在的情况下，不需加入　ｂＦＧＦ一　。用表达ＳＣＦ的ＳＴ（）＃８细胞系培养ＥＳ细　胞，其生长可不依赖外源ＳＣＦ¨ｊ。　与其它类型的细胞培养不同的是，干细胞的培养　必须使用细胞分化抑制因子（ＤＩＡ）。其中起主导作　用，也是目前研究最多、使用最广泛的是ＬＩＦ。ＥＳ细　胞培养液也含有ＤＩＡ，可配制成条件培养基；饲养层　细胞也可起到抑制细胞分化，促进增殖的作用。　过大批地培养并分装冻存，使用时再融化制备滋养层　细胞的方法而得到弥补一　一。　由于ＰＭＥＦ不具耐药性，故不能作为转染有外　源性基因的ＥＳ细胞筛选用。　２．１．２小鼠成纤维细胞无限系（ＳＴ（））细胞　用ＳＴＯ饲养层培养ＥＳ细胞时，可以较好地维　持ＥＳ细胞的未分化状态，但是一般认为，ｓＴＯ细胞　系经长期培养和反复冻存后会使分泌细胞因子的能　力下降　。　，使ＥＳ细胞的集落形态不够典型，且　不能有效维持其二倍体核型　。　２培养体系　依据ＤＩＡ的来源不同，培养体系分为有饲养层　及无饲养层两大干细胞培养体系。　２．１有饲养层培养体系　但对不同的ＥＳ细胞，ＳＴＯ的影响不同。　小鼠全胚或ＩＣＭ在ＳＴＯ饲养层和ＰＭＥＦ饲养　层均附着增殖，并可获得ＥＳ细胞。　以ＳＴｏ、ＰＭＥＦ和ＳＴＯ＋ＢＲＩ　（大鼠肝细胞）为　材料克隆猪ＥＳ细胞，各实验组都能使ＥＳ细胞附着　和增殖，但ＳＴＯ和ＳＴ（）４－ＢＲＬ组最高传代数为１０　代，而ＰＭＥＦ组传代数仅为３代。将小鼠囊胚在不同　类型饲养层培养，在４　ｄ之内，内细胞团分化速度依　次为ＳＴＯ＞ＰＭＥＦ＞ＲＥＦ　Ｅ　。　饲养层细胞是通过细胞接触机制和非接触机制　促进ＥＳ细胞增殖并阻止其分化。它能分泌多种细胞　因子，提供ＥＳ细胞生长的环境和信号。饲养层对ＥＳ　细胞的分化抑制是其分泌多种因子共同作用的结果。　不同ＥＳ细胞的最佳饲养层不尽相同，不同的饲　养层细胞在使用上也各具优缺点。　可做为饲养层细胞有原代小鼠胚胎成纤维细胞　（ＰＭＥＦ）、小鼠成纤维细胞无限系（ＳＴ（））一　－　、转入　了ＳＣＦ基因的ＳＴＯ＃８细胞１　３］、３Ｔ３细胞和ＯＰ９细　Ｔｈｏｍｓｏｎ等　于１９９８年底分别报道了利用　小鼠的ＳＴＯ细胞作为饲养层，分离培养人受精卵发　育的胚泡内层细胞和怀孕５～９周的流产胎儿的性腺　脊细胞，建立了人的ＥＳ和ＥＧ（胚胎原始性生殖细　胞）细胞系，此细胞具有正常的核型，表达高水平的端　粒酶活性和灵长类ＥＳ细胞的特异性细胞表面分子，　胞、原代鸡胚成纤维细胞、卵巢、输卯管、子宫内膜细　胞和胎肝成纤维细胞等细胞　，以及膀胱癌细胞、子　宫颈鳞状上皮细胞癌细胞等肿瘤细胞　。　２．１．１原代小鼠胚胎成纤维细胞（ＰＭＥＦ）　ＰＭＥＦ作为饲养层培养ＥＳ细胞是一种最早和　常用的方法一　’！　。，它能有效地促进ＥＳ细胞的增殖并　维持其未分化性和多潜能性，可用于大多数动物ＥＳ　可分化发育为含外、中、内三个胚层的细胞。　２．１．３其它细胞　ＳＮＬ是一种转染了ｎｅｏ＂／抗性基因和ＬＩＦ基因　的ＳＩＭ小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌本苷亚　系ＳＴＯ细胞亚株，它可以长期在体外进行传代和冻　存，并能分泌抑制ＥＳ细胞分化的ＬＩＦ，故作为饲养层　细胞一”，体外培养条件基本同ＰＭＥＦ饲养层，但需加　３Ｏ３　细胞的分离，如用ＰＭＥＦ作饲养层，能成功地分离到　广西科学　２００２年１１月　第９卷第４期　维普资讯 http://www.cqvip.com Ｌ一谷氨酰胺。使用ＳＮＬ可免去准备怀孕母鼠的繁琐　条件培养基用于ＥＳ细胞的培养，与加ＬＩＦ的ＥＳ细　胞培养基具有同样的培养效果　经济。　工作。又因其带有ｎｅｏＴ抗性基因，故可以用于转基因　ＥＳ细胞的筛选。　以胎牛肝成纤维细胞（ＢＦＬＦ）作为饲养层的培养　可分离到绵羊和山羊类ＥＳ细胞　。　，而且远比ＬＩＦ　２～３周龄大鼠的心肌细胞培养上清也可以用于　ＥＳ细胞培养＿３　。　ＥＳ细胞在膀胱癌细胞、子宫颈鳞状上皮细胞癌　细胞等肿瘤细胞饲养层上生长更旺盛　。　用于制备条件培养基的其它细胞还有：ＨＢＣ（人　膀胱癌细胞株５６３７），ＰＳＡ一１（一种小鼠ＥＣ细胞），　ＰＣ１０—６Ｒ（ＬＩＦ转染的ＣＯＳ细胞），Ｔ一３细胞（一种小　鼠ＥＣ细胞）［３１ｊ。　在ＣＲｌａａ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｏｓｅｎｋｒａ　１氨基酸）＋亚硒酸　原代鸡胚成纤维细胞饲养层使小鼠ＥＳ细胞克　隆传１０代以上卫　。　２．２无饲养层培养体系　采用无饲养层的方法进行培养，首先，可克服使　用饲养层细胞培养ＥＳ细胞的繁琐；其次，可排除实　验中的细胞接触抑制作用及饲养细胞分泌其它因子　的干扰，从而更为准确地研究某一因子对ＥＳ细胞生　钠＋胰岛素＋转铁蛋白＋５　９／５ＦＣＳ培养系统中低密　度悬浮培养体外受精牛胚胎，并用免疫外科手术法分　离ＩＣＭ，该ＩＣＭ在该培养基中培养１０１　ｄ，保持未分　化状态。用这种方法建立了１５个培养的ＩＣＭ细胞　系。将培养的ＩＣＭ细胞进行核移植获得３４枚囊胚移　入２７个受体内，１３头妊娠，最终产下４头犊牛［３７　２。　对细胞培养液能抑制ＥＳ细胞分化的机理的研　究发现，细胞培养液中含有分化抑制因子（ＤＩＡ）。　长的影响；第三，能排除处理饲养层细胞时所用丝裂　霉素对ＥＳ细胞的毒性作用。但用条件培养基作培养　液分离和克隆ＥＳ细胞，只能在短期传代中维持ＥＳ　细胞全能性及核型正常　。　常用的方法是在培养液中加入外源的Ｉ　１Ｆ和使　用能分泌Ｉ　ＩＦ的细胞制备条件培养液等。用转基因　Ｓｍｉｔｈ　认为，ＤＩＡ和ＬＩＦ是同一种物质，在无饲养　层细胞条件下，向培养基中加入ＬＩＦ（１０　ｎｇ／ｍ１），可　维持ＥＳ细胞和畸胎瘤（ＥＣ）细胞的多潜能性。　从小鼠ＳＴＯ饲养层细胞培养液中提取的ＤＩＡ，　的方法，将Ｉ　ＩＦ的基因转入ＥＳ细胞中，建立不依赖　外源ＬＩＦ的ＥＳ细胞系，也是方法之一。　２．２．１　ＬＩＦ　能部分抑制ＥＳ细胞分化，该多肽因子分子量为　５７００ｌ３　。ＬＩＦ是一种白血病抑制因子，也是理想的ＥＳ细　大鼠ＢＲＬ细胞在培养的过程中，能分泌一　胞分化抑制剂［３２，３　３］。外源ＬＩＦ可使ＥＳ细胞在未分化　状态下长期培养，在ＥＳ细胞培养液中加入ＬＩＦ即可　用于无饲养层的ＥＳ细胞培养。　种抑制畸胎瘤（ＥＣ）和ＥＳ细胞分化的因子（其结构与　ＬＩＦ相似）。Ｙａｎｇ等　。　用小鸡肝细胞条件培养基，证　明禽类细胞也能产生一种ＤＩＡ样因子，抑制小鼠ＥＳ　细胞的分化。　对小鼠而言，在一定浓度范围内，Ｉ　ＩＦ与ＥＳ细胞　克隆效率之间存在量效关系。当ＬＩＦ浓度达到１　０００　～由细胞培养液配制的条件培养基含有５００～　５０００　ＩＵ／ｍｌ　ＬＩＦ　Ｅ。¨。　５　０００　ＩＵ／ｍｌ时，从ＩＣＭ中分离ＥＳ细胞的效率可　达９５　９／５以上一　。也有实验认为ＬＩＦ的最适用量为　１　０００　ＩＵ／ｍｌ￣　。　２．２．３建立不依赖于ＬＩＦ的ＥＳ细胞系　Ｂｅｒｇｅｒ等　。。利用无ＬＩＦ的培养系统建立了ＥＳ　细胞系，即使在培养液中加入外源性ＬＩＦ抗体也不　影响ＥＳ细胞生长，并可长期保持未分化状态和多向　分化潜能。杜宪兴等　将ＬＩＦ基因转入ＥＳ细胞可使　２．２．２细胞培养液　Ｓｍｉｔｈ和Ｈｏｏｐｅｒｌ３　研制了一种条件培养基用于　分离和克隆ＥＳ细胞。其方法是将基础培养液　（Ｇｌｕｓｇｏｗ—Ｅａｇｌｅ改良培养液＋０．１　Ｍ非必需氨基酸　＋１　ｍＭ丙酮酸钠＋１０　９／６ＮＢＳ＋０．２　ｍＭ二巯基乙　ＥＳ细胞不依赖外原性ＬＩＦ而长期不分化增殖，且不　影响ＥＳ细胞的多向分化潜能性。　２．３无血清ＥＳ细胞培养基　ＧＩＢＣＯ公司新近推出一种替代ＦＣＳ的无血清　ＥＳ细胞培养基，更有利于ＥＳ细胞的诱导分化研究。　醇）与ＳＴＯ饲养层细胞共同培养２４　ｈ（３７　Ｃ、５　ＣＯ　、饱和湿度）后获取培养液，用０．２／ｘｍ滤膜过滤，　用该培养液培养胚胎瘤细胞。其能促进细胞增殖，抑　制由维甲酸（ＲＡ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导的细胞　分化。　但有实验观察证实，在无血清ＥＳ细胞培养基中生长　的ＥＳ细胞贴附力不如在有血清ＥＳ细胞培养基中生　长的细胞强。除了使用明胶增强细胞的贴附力外，可　以尝试使用多聚氨酸、纤维结合蛋白等增强细胞贴附　力的物质等ｕ　。　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏ１．９　Ｎｏ．４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２００２　用大鼠肝细胞（ＢＲＬ）培养液配制大鼠肝细胞条　件培养基（ＢＲＬ—ＣＭ），在无饲养层条件下分离和克隆　了小鼠ＥＳ细胞　。用ＢＲＩ　细胞培养上清液制备的　３０４　维普资讯 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综上所述，各种ＥＳ细胞培养体系的研究与开　发，使ＥＳ细胞的培养更有效、方便和经济，从而进一　步推动干细胞的研究与应用。　参考文献　１　Ｍａｒｔｉｎ　Ｇ　Ｒ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｆｒｏｍ　ｅａｒｌｙ　ｍｏｕｓｅ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ　ｂｙ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｆｒｏｍ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，１９９８・９５：１３７２６．　黄　冰，黄文革，钟女奇等．小鼠胚胎干细胞在六种培养　体系的培养观察．中国实验动物学报，２０００，８（１）：１～６．　Ｉｓｈｉｗａｔａ　Ｊ，Ｔｏｋｉｅｄａ　Ｙ，Ｉｓｗａｔａ　Ｃ　ｅｔ　ａ１．．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｆｅｅｄｅｒ　ｃｅｌｌｓ（ｈｕｍａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｂｙ　ｃｏｃｕｌｔｕｒｅ．Ｈｕｍ　Ｃｅｌｌ，１９９７，１０（４）：２３７　～２４６．　ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｍｏｍａ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，　１９８１，７８（１２）：７６３４～７６３８．　Ｌｅｄｅｒｎａｎｎ　Ｂ，Ｂｕｒｋｉ　Ｋ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｇｅｒｍ—ｌｉｎｅ　ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　Ｃ５　７ＢＬ／６　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ．Ｅｘｐ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓ，１９９１，１９７（２）：２５４～２５８．　２　Ｅｖａｎｓ　Ｍ　Ｊ，Ｋａｕｆｍａｎ　Ｍ　Ｈ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｍｏｕｓｅ　ｅｍｂｒｙｏｓ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８１。　Ｓｕｅｍｏｒｉ　Ｈ　Ｎ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｍｂｒｙｏ—ｄｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｍ　２９２：１５４～１５６．　（ＥＳ）ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｍｏｕｓｅ　ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ：ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｆｅｅｄｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌａｙｅｒ．Ｄｅｖｅｌｏｐ　Ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　Ｄｉｆｆｅｒ，１９８７．２９（２）：１３３～　３　Ｍａｔｓｕｉ　Ｙ，Ｚｓｅｂｏ　Ｋ。Ｈｏｇａｎ　Ｂ　Ｌ　Ｍ．Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌｕｒｉｐｏｔ—　ｅｎｔｉａｌ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｍｕｒｉｎｅ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　１３７．　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｃｅｌ１．１９９２，７０（５）：８４１～８４７．　常万存，窦忠英，马鸿飞等．原始生殖细胞的人类胚胎干　４　Ｓｍｉｔｈ　Ａ，Ｈｅａｔｈ　Ｊ　Ｋ，Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ　Ｄ　Ｄ　ｅｔ　ａ１．．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３６：６６８～６９０．　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　ｍａｉｎｔａｉｎｓ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　细胞克隆．西北农业大学学报，１９９８，２６（６）：１０５～１０８．　Ｗ．１１ｉａｍｓ　Ｒ．Ｈｉｌｔｏｎ　Ｄ．Ｐｅａｓｅ　Ｓ　ｅｔ　ａ１．．Ｍｙｅｌｏｉｄ　ｌｅｕｋａｅｍｉａ　勰５　陈瑞明．动物组织培养技术及其应用．北京：科学出版社，　１９９８．　ｅｍｔｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ，ｌ９８８，３３６。６８４～６８７．　６孟国良．汤富酬，滕路等．小鼠胚胎干细胞（ＥＳ细胞）建　高舒平，时红伟，秦　英等．用于胚胎干细胞分离培养的　饲养层的制作．中国实验动物学杂志，２０００，１０（２）：７８～　８１．　系和维持过程中的问题及对策．遗传，２００１，２３（３）：２９２～　２９４．　Ｍｉｎｄｙ　Ｄ　Ｇ，Ｍａｒｙ　Ｌ　Ｔ．Ｓｅｒｕｍ—ｆｒｅｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｍｕｒｉｎｅ　ＥＳ　７　Ｍｉｔａｎｉ　Ｔ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｎ，Ｋａｗａｓｅ　Ｅ　ｅｔ　ａ１．．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌｓ．Ｆｏｃｕｓ，１９９８。２０：８．　ａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　Ｌａｎｎａｃｃｏｎｅ　Ｐ　Ｍ，Ｔａｂｏｎｅ　Ｇ　Ｖ，Ｇａｒｔｏｎ　Ｐ　Ｌ．Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｒａｔ．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，１９９４，４１：３３６．　８　Ｓｔｅｗａｒｔ　Ｃ　Ｌ。Ｇａｄｉ　Ｉ。Ｂｈａｔｔ　Ｈ．Ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌｓ　ｃａｎ　ｒｅｅｎｔｅｒ　ｔｈｅ　ｇｅｒｍ　ｌｉｎｅ．Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，１９９４．１６１　（２）：６２６～６２８．　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ａｒｅ　ｃａｐａｂｌｅ　ｏｆ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｃｈｉｍｅｒａｓ．Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，１９９４，１　６３：２８８～２９２．　尚克刚，胡新立，李子玉等．饲养层对维持新建ＥＳ细胞系　的影响．北京大学学报（自然科学版），１９９４，３０（４）：ｊ。Ｏ～　５Ｏ８．　９　Ｓｈｉｍ　Ｈ．Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ—Ａｄａｎ　Ａ，Ｃｈｅｎ　Ｌ　Ｒ　ｅｔ　ａ１．．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌ１．Ｂｉｏｌ　ｏｆ　Ｒｅｐｒｏｄ，１９９７，５７：１０８９￣１０９５．　Ｓｕｋｏ　Ｙ　Ａ，Ｖａｔｏｌｉｎ　Ｓ　Ｙ，Ａｌｅｖｔｉｎａ　Ｎ　ｅｔ　ａ１．．Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　１　０　Ｃｈｅｒｎｙ　Ｒ　Ａ，Ｍｅｒｅｉ　Ｊ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｉｎｉｔｉａｔｅｄ　ｉｎ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍ　ｃｅｌｌ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｍｏｒｕｌａｅ．ｉｎｎｅｒ　ｃｅｌｌ　ｍａｓｓ　ａｎｄ　ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ　ｏｆ　ｍｉｎｋ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９３，３６：１４８～１５８．　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，１９９４，４１：１７５．　１１　潘兴华，郭坤元，陈系古等．胚胎干细胞的生物学特性及　体外诱导分化．生命科学研究，２０００，４（２）：４８～５５．　１２　Ｓｐｅｃｔｏｒ　Ｄ　Ｌ，Ｇｏｌｄｍａｎ　Ｒ　Ｄ，Ｌｅｉｎｗａｎｄ　Ｉ　Ａ．细胞实验指　Ｙａｎｇ　Ｚ，Ｐｅｔｉｔｔｅ　Ｊ　Ｎ．Ｕｓｅ　ｏｆ　ａｖｉａｎ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｉｎ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｐｏｕｌｔｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．　１９９４，７３（７）：６７４～９６５．　南．黄培堂等译．北京：科学出版社，２００１．　１３　Ｄｅｌｈａｉｓｅ　Ｆ，Ｂｒａｌｉｏｎ　Ｖ，Ｓｃｈｕｕｒｂｉｅｒｓ　Ｎ　ｅｔ　ａ１．．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅ—　Ｐｉｅｄｒａｈｉｔａ　Ｊ　Ａ，Ｍｏｏｒｅ　Ｋ，Ｏｅｔａｍａ　Ｂ　ｅｔ　ａ１．．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｃｈｉｍｅｒａｓ　ｕｓｉｎｇ　ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ　ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌ—　ｎｔ　ｏｆ　ａｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｆｒｏｍ　８－ｃｅｌｌ　ｓｔａｇｅ　ｍｏｕｓｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｃｏｌｏｎｉｅｓ．Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐｒｏｄ，１９９８，５８（５）：１３２１～１３２９．　Ｍｅｉｎｅｃｋ　Ｔ，Ｍｅｉｎｅｃｋｅ　Ｂ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＥＳ—ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｅｍｂｒｙｏｓ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｍｏｒｐｈｏｌ，１９９６，３４（４）：２３７～２４３．　１４　Ｄｕｒｃｏｖａ　Ｈ　Ｇ，Ｐｒｅｌｌｅ　Ｋ，Ｍｕｌｌｅｒ　Ｓ　ｅｔ　ａ１．．Ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ＰＧＣｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｓ　ＬＩＦ　ａｎｄ　ｐｏｒｃｉｎｅ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ—ｂｏｕｎｄ　ｏｖｉｎｅ　ａｎｄ　ｃａｐｒｉｎｅ　ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ．Ａｎｉｍａｌ　Ｂｒｅｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃ，１９９６，１１３：４１３～４１６．　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｆａｃｔｏｒ．Ｚｙｇｏｔｅ，１９９８，６（３）：２７１～２７５．　安立龙，效梅，窦忠英等．细胞外环境中分化抑制物对　１　５　Ｔｈｏｍｓｏｎ　Ｊ　Ａ，Ｉｔｓｋｏｖｉｔｓ—ｅｌｄｅｒ　Ｊ　Ｓ　ｅｔ　ａ１．．Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎ　ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ。１９９８。　２８２（５３９１）：１１４５～１１４８．　动物胚胎干细胞克隆率的影响．家畜生态，２００１，２２（２）：　４４～４８．　１　６　Ｓｈａｍｂｌｏｔｔ　Ｍ　Ｊ，Ａｘｅｌｍａｎ　Ｊ，Ｇｅａｒｈａｒｔ　Ｊ　Ｄ．Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　（下转第３１１页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｏｎ　ｐａｇｅ　３１１）　３０５　广西科学　２００２年１１月　第９卷第４期　维普资讯 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＂　加　Ｆｅｎｇ　Ｑ　Ｌ，Ｐｕ　Ｇ．Ｐｅｉ　Ｙ　ｅｔ　ａ１．．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ　ａｎｄ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃａｒｂｏｎａｔｅ　ｃｒｙｓｔａｌｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　Ｗｅｉｓｓ　Ｉ　Ｍ．Ｋａｕｆｍａｎｎ　Ｓ，Ｍａｎｎ　Ｋ　ｅｔ　ａ１．．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｒｌｕｃｉｎ　ａｎｄ－ｐｅｒｌｕｓｔｒｉｎ，ｔｗｏ　ｎｅｗ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｈｅｌｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｌｌｕｓｃ　Ｈａｌｉｏｔｉｓ　ｌａｅｖｉｇａｔａ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕ，２０００，２６７：１　７～２１．　ｆｒｏｍ　ｍｏｌｌｕｓｋ　ｓｈｅｌ１．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｒｙｓｔａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ，２０００，２１　６：　４５９～４６５．　Ｍａｒｉｎ　Ｆ，Ｃｏｒｓｔｊｅｎｓ　Ｐ，ｄｅ　Ｇａｕｌｅｊａｃ　Ｂ　ｅｔ　ａ１．．Ｍｕｃｉｎｓ　ａｎｄ　ｍｏｌｌｕｓｃａｎ　ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｊ　ｂｉｏ１　ｃｈｅｍ，２０００，２７５（２７）：２０６６７　～马文涛，沈亦平，曹连欣．贝壳有机质对ＣａＣ０。晶形形成　的控制作用．武汉大学学报（自然版），１　９９６，４２（４）：４６９～　４７４．　２０６７５．　Ｓｈｅｎ　Ｘ　Ｙ．Ｂｅｌｃｈｅｒ　Ａ　Ｍ，Ｈａｎｓｍａ　Ｐ　Ｋ　ｅｔ　ａ１．．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｕｓｔｒｉｎ　Ａ，ａ　ｍａｔｒｉｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｆａｌｉｎｉ　Ｇ，Ａｌｂｅｃｋ　Ｓ，Ｗｅｉｎｅｒ　Ｓ　ｅｔ　ａ１．．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ａｒａｇｏｎｉｔｅ　ｏｒ　ｃａｌｃｉｔｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｂｙ　ｍｏｌｌｕｓｋ　ｓｈｅｌｌ　ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１　９９６，２７１（５）：６７～６９．　Ｓｍｉｔｈ　Ｂ　Ｌ．Ｔｈｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ｌｅａｒｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｐｒｏｂｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．　ｆｒｏｍ　ｓｈｅｌｌ　ａｎｄ　ｐｅａｒｌ　ｎａｃｒｅ　ｏｆ　Ｈａｈ＇ｏｔｉｓ　ｒｕｆｅｓｃｅｎｓ．Ｊ　Ｂｉｏ　Ｃｈｅｍ，１　９９７，２７２（５１）：３２４７２～３２４８１．　Ｓｕｄｏ　Ｓ，Ｆｕｊｉｋａｗａ　Ｔ，Ｎａｇａｋｕｒａ　Ｔ　ｅｔ　ａ１．．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｍｏｌｌｕｓｃ　ｓｈｅｌｌ　ｆｒａｍｗｏｒｋ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ，１　９９７，３８７（５）：　５６３～５６４．　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，７４：９３　～１１３．　Ｓａｍａｔａ　Ｔ，Ｈａｙａｓｈｉ　Ｎ，Ｋｏｎｏ　Ｍ　ｅｔ　ａ１．．Ａ　ｎｅｗ　ｍａｔｒｉｘ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆａｍｉｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｎａｃｒｅｏｕｓ　ｌａｙｅｒ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｋｉｍ　Ｙ　Ｗ，Ｋｉｍ　Ｊ　Ｊ，Ｋｉｍ　Ｙ　Ｈ　ｅｔ　ａ１．．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｍａｔｒｉｘ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｔ　ｔｈｅ　ｂｏｎｅ—　ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｎａｃｒｅ　ｉｎｔｅｒｆａｃｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００２，　２３：２０８９～２０９６．　Ｐｉｎｃｔａｄａ　ｆｕｃａｔａ．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，ｌ９９９，４６２：２２５～２２９．　Ｂｅｌｃｈｅｒ　Ａ　Ｍ，Ｗｕ　Ｘ　Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ　Ｒ　Ｊ　ｅｔ　ａ１．．Ｃｏｎｔｒｏ１　ｏｆ　ｃｒｙｓｔａｌ　ｐｈａｓｅ　ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ　ａｎｄ　ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｍｏｌｌｕｓｃ—　ｓｈｅｌｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９６，３８１（２）：５６～５８．　（责任编辑：邓大玉）　（上接第３０５页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｆｒｏｍ　ｐａｇｅ　３０５）　３２杜宪兴，施渭康．白血病抑制因子与发育和干细胞生长、　分化．生命科学，１９９６，８（１）：２７～３Ｏ．　３　３　Ｐｅａｓｅ　Ｓ，Ｂｒａｇｈｅｔｔａ　Ｐ，Ｇｅａｒｉｎｇ　Ｄ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ（ＥＳ）ｃｅｌｌ　ｉｎ　ｍｅｄｉａ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　３７　Ｓｉｍｓ　Ｍ　Ｍ，Ｆｉｒｓｔ　Ｎ　Ｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｔｕｓ　ｆｒｏｍ　ｔｏｔｉｐｏｔｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌ１．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，１９９４，６：５６９～５７５．　３８　Ａｉｔｓｔｉｎ　Ｇ　Ｓ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ（ＤＬＡ／ＬＩＦ）　ａｎｄ　ｍｏｕｓｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，１　９９２，１　５１：３３９～３５１．　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ（ＬＩＦ）．Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，１　９９０，１４１：　３３４～３５２．　３９　Ｍａｓｓａｇｕｌ　Ｊ．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｙｐｅ　ｂ—　３４　Ａｉｔｓｔｉｎ　Ｇ　Ｓ　ｅｔ　ａ１．．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ．Ｊ　Ｂｉｏ　Ｃｈｅｍ，１　９８５，２６０：４５５１　～４５５４．　４０　Ｂｅｒｇｅｒ　Ｃ　Ｎ，Ｓｔｒｕｍ　Ｋ　Ｓ．Ｓｅｌｆ—ｒｅｎｅｗａｌ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　（ＤＩＡ／ＬＩＦ）ａｎｄ　ｍｏｕｓｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，１　９９２，１　５１：　３３９～３５１．　３５　Ｓｍｉｔｈ　Ａ　Ｇ，Ｈｏｏｐｅｒ　Ｍ　Ｌ．Ｂｕｆｆａｌｏ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ａ　ｄｉｆｆｕｓｉｂｌｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｒｉｎｅ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ，１９８７，１２１：１～９．　４１　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｆｅｅｄｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｌｅｕｋａｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ．Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ，１　９９７，１４（２　～３）：１４５．　杜宪兴，施渭康．ＬＩＦ基因传染的ＥＳ细胞生长与分化特　性的研究．实验生物学报，１　９９６，２９（４）：４１　３～４２１．　３６韩　嵘，柴桂萱，尚克刚．大鼠心肌条件培养基对形成小　鼠ＥＳ细胞集落的影响．北京大学学报（自然科学版），　１　９９７，３３（２）：１８５～】８８．　（责任编辑：蒋汉明）　广西科学　２００２年１１月　第９卷第４期　３ｌｌ