4%多聚甲醛溶液的配制方法

4％多聚甲醛溶液配制方法

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4％多聚甲醛溶液用途：

进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

4％多聚甲醛溶液配制方法：

1) 900 ml dd H20 + 500 ul 1N NaOH 2) Heat to 65-70℃

3) While stirring, add 40 g paraformaldehyde

4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved 5) Let cool to room temperature 6) Add 100 ml of 10X PBS 7) pH to 7.3 with HCl 8) Sterile with filter

9) Store at 4℃, protected from light

称量2g，放置与50ml pbs中，37度孵箱2天后，4%的多聚甲醛就配好了。

配制0.1M的PBS，PH=7.2-7.4,100mlPBS+4g多聚甲醛，放入65℃水浴，一般半天左右就可以溶好。

因为需要现用现配所以一般就配10毫升。

用一个带盖的玻璃离心管加0.4克多聚甲醛，加8毫升PBS，加1毫升2N的NAOH，放到60度的水浴里，10分钟，拿出来用手颠倒几次，基本上就都溶了，再用HCL调ph到7.2，最后定容就行了，我最快10分钟搞定。

取4g 多聚甲醛溶到100 PBS缓冲液，加2滴1N的NaOH（pH7.4）,60度水浴磁力搅拌，大约1-2小时可以溶解。

4%多聚甲醛溶液的配制:

在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在

通风橱中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温,调整PH值为7.4,使用前新鲜配制.

常用的固定剂种类很多,固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性.固定剂可分为两类:有机溶剂和交联剂.有机溶剂如乙醇和丙酮能够去处脂 类物质使细胞脱水,把蛋白质沉淀在细胞结构上.交联剂如多聚甲醛一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来,形成一个相互交联的抗原网.许多人发现用交联剂 固定细胞效果较好,尤其是做免疫荧光的时候,当

然没有固定的规则可言.不过,单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内,因此,标本固定后必须用非离 子去污剂(triton-x 100)透化标本.

4％多聚甲醛溶液（PFA）配制

称取40gPFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌

至60－65℃,使成乳白色悬液。用1.0mmol/L 的NaOH调PH至7.0使呈清亮状（滴加），再加入约500ml 2×PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中）。可再检测一下PH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃（保存备用）。

注意：1.配制时应在通风条件下操作，并避免接触皮肤及吸入（戴口罩及手套），因PFA有较强的毒性，对粘膜及皮肤有刺激作用。2.加热时，温度不可过 高，常为60－65℃。否则PFA降解失效，配制好的PFA虽可有效一点时间，但过久的液体，固定效果下降，应用前新鲜配制。

除了用DEPC水配制PFA外，也可以用灭菌蒸馏水或经DEPC或外源RNA酶清除剂处理的0.01－0.1％/L的PBS配制，方法及主要事项同上。