实验二 紫外线对淀粉酶产生菌的诱变效应

一、实验目的：

1、写出完整的紫外线诱变淀粉酶产生菌的实验操作步骤；

2、写出分离培养基及其相关试剂所需的量、仪器、器皿所需的量；3、了解紫外线诱导基本原理及方法。

二、实验原理：菌的分离与纯化，菌的紫外诱导诱变改良。三、实验材料：

1. 培养皿、移液管、刮铲、显微镜等,

2. 可选取厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤 ;

3. 培养基与试剂 :牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、可溶性淀粉、蒸馏水、琼脂粉、路戈氏碘液, 碘片、碘化钾 。4. 紫外灯、磁力搅拌器、细胞计数平板。

四、实验步骤：

1、用梯度稀释法来分离淀粉酶产生菌；

2、检测试剂配置：路戈氏碘液, 碘片1g,碘化钾2g,蒸馏水300mL。配制方法:先用少量35mL蒸馏水溶解碘化钾,再加入碘片,待碘片完全溶解后,加水稀释至300mL于棕色瓶内备用。

3、纯化淀粉酶产生菌：将保存的菌株用接种环沾取少量培养物至平板上,并进行2-3次划线分离,挑取单菌落至平板上,培养后观察菌苔生长情况并镜检验证为纯培养。将纯化后产酶能力较强菌株保存至斜面培养基中培养；

4、将初步筛选到的产酶能力较强的菌株从斜面接种到液体培养基中37℃振荡培养2d,吸菌液以1:10的接种量转接到液体培养基中继续培养1d后的菌液用于紫外诱变；

5、（1） 将紫外线灯开关打开预热约20分钟。 （2） 取直径6cm无菌平皿2套分别加入上述菌液5ml并放入无菌搅拌棒于平皿中。 （3） 将盛有菌悬液的2平皿置于磁力搅拌器上，一个平皿作为对照，不用紫外处理；另一平皿置于15W紫外灯下30cm处间歇照射4min,然后用无菌水将菌液稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-88个梯度涂平板；用上述的分离培养基稀释（均在红灯下进行），每个稀释度涂平板3只，每只平板加稀释菌液0.1ml，用无菌玻璃刮棒涂匀。以同样操作取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。然后用黑布包好置于37℃恒温培养箱中培养2d。注意、每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。 （4）将培养2d后的平板取出进行细菌计数，根据对照平板上菌落数，计算出每毫升菌液中的活菌数。计算出紫外线处理后的存活细胞数及其致死率。

存活率=处理后每毫升活菌数/对照每毫升活菌数*100%

致死率=（对照每毫升活菌数-处理后每毫升活菌数）/对照每毫升活菌数*100%

6、将细胞计数后的平板，分别向菌落数在5-6个左右的平板内加卢戈氏碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值、HC值。与对照平板进行比较，根据结果说明诱变效应。并选取HC比值大的菌落移接到试管斜面上进行保存。五、实验报告：

1、计算存活率、致死率及讲明其死亡的可能原因。2