一、 实验目的
1、 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 2、 学习分光光度计的原理和操作方法。 3、 了解;®酮法测定可溶性糖含量的原理。
二、 实验原理
总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、 芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性 的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与 蕙酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。 糖类与蕙酮反应生成的有色物质， 在可见光区的吸收峰为630nm,可在此波长下 进行比色，故可用丁糖的定量。 三、 实验器材
麦
1、 材料：梨
2、 仪器：分光光度计、包温水浴锅、电子分析天平■、高速冷冻离心机、容量瓶 （100mLX 2）、玻璃漏斗、量筒、研钵、锥形瓶、试管、移液管、 pH试纸 3、 试剂：
蕙酮试剂：取2g蕙酮溶丁 1000mL体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。 标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）:称取100mg葡萄糖，溶丁蒸僻水并稀释至 1000mL （可加几滴甲苯作防腐剂）。
6mol/L HCl 溶液
20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶丁蒸僻水并稀释至 100mL。
四、 实验操作
1、葡萄糖标准曲线的绘制：
取6支大试管，从0〜5分别编号，按下表加入各试剂
试剂 管号 标准匍缶!糖溶液/ml 蒸僻水/ml 蕙酮试剂/ml 0 0 1.0 4.0 1 0.1 0.9 4.0 2 0.2 0.8 4.0 3 0.3 0.7 4.0 4 0.4 0.6 4.0 5 0.5 0.5 4.0 置冰水浴中5min 煮沸10min,冷却后室温放置 10min，在620nm处比色 A620nm 以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线。
2、 样品中还原糖的提取和测定
称取1g梨，加蒸僻水约3mL,在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用 约12mL蒸僻水冲洗研钵2〜3次，洗出液也转入三角烧瓶中。丁 50C水浴中保 温约30min （使还原糖浸出），取出置丁离心管内，5000r/min离心10min,冷却 后定容至100mL。
吸取1mL滤液置丁试管中，浸丁冰浴中冷却，再加入 4mL B酮试剂，沸水 浴中煮沸10min,取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度 值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
3、 样品中总糖的提取、水解和测定
称取1g梨，加蒸僻水水约3mL,在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并 用约12mL蒸僻水冲洗研钵2〜3次，洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶 中加入6mol/L盐酸
10mL,搅拌均匀后在沸水浴中水解
僻水定容至100mL。
30min ,冷却后用
20%NaOH溶液中和至pH呈中性，取出置丁离心管内，5000r/min离心10min, 然后用蒸
吸取1mL滤液置丁试管中，浸丁冰浴中冷却，再加入 4mL B酮试剂，沸水 浴中煮沸10min,取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度 值由标准曲线查算出样品液的糖含量。 六、计算
按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w）。
CIVI
W（还原糖）=——X100%
m
、 C2V2
W（总糖）= ---- K0.9X100%
m
（乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。 ） 其中： W （还原糖）：还原糖质量分数（%）
W （总糖）：总糖质量分数（%） C1:还原糖的质量浓度（mg/mL） C2:水解后还原糖的质量浓度（mg/mL） V1:样品中还原糖提取液的体积（mL） V2:样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量
五、实验思考
1、 应用蕙酮法测得的可溶性糖包括哪些？
2、 干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？怎样避免？
3、 了解可溶性糖含量在植物生理研究和实际上有什么意义？
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