•药物研究•
注射用替莫唑胺的制备及质量研究
赵砚荣
郭杰
江苏奥赛康药业有限公司，江苏南京211112
丨摘要1目的探讨生产高质量及稳定的注射用替莫唑胺处方及制备工艺。方法通过枸橼酸用量确定注射用替莫唑 胺处方，通过配液温度、活性炭用量和冻干工艺的考察，确定注射用替莫唑胺的制备工艺。结果最佳处方为替莫 唑胺（100 mg),甘露醇(600 mg),枸橼酸（100 mg),聚山梨酯-80(120 mg),枸橼酸钠(235 mg),盐酸（160 mg)。配 制温度控制在25丈以下，药液采用盐酸调节PH值至3.0~4.5,同时存放于15T以下;最佳冻干工艺为制品在-40丈， 预冻3 h;导热油升温至0冗,保温64~80 h;导热油升温至15丈,保温18~24 h;最终制品在35°C,保温6~12 h ,高 效液相色谱法检测141101、141102、141103样品的含量分别为101.1%、100.8%、100.6%。141101和141103样品在
12个月长期试验、加速试验考察期间，本品在市售包装下，有关物质略有增加，水分结果略有增大，但均在限度范 围内，其他各考察指标均没有明显变化；141丨02样品在12个月长期试验、加速试验考察期间，市售包装下，水分 有所增加，但均在限度范围内，其他各考察指标均没有明显变化。结论以本品处方及工艺制备的替莫唑胺制剂， 质量稳定，重复性好，可行性佳，适于工业化生产。
丨关键词]替莫唑胺;制备工艺；配液温度；脱炭工艺；冻干工艺；质量研究[中图分类号]R979.1
[文献标识码]A
[文章编号]1674-4721 (2019)10(C>-0035-04
Study of preparation and quality of Temozolomide for injection
ZHAO Yan-rong GUO Jie
Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co., Ltd., Nanjing 211112, China
[Abstract] Objective To explore the formulation and preparation process of Temozolomide for injection with high quality and stability. Methods The formulation of Temozolomide for injection was determined by the amount of citric acid. The preparation process of temozolomide for injection was determined by investigating the temperature of liquid mixing, the amount of activated carbon removal and the freeze-drying process. Results The best prescriptions were Temozolo- mide (100 mg), Mannitol (600 mg), citric acid (100 mg), polysorbide—80 (120 mg), sodium citrate (235 mg), hydrochloric acid (160 mg). The preparation temperature was controlled below 25X1, and the pH value of the liquid was adjusted to 3.0-4.5 by hydrochloric acid, and stored below 15T1 at the same time. The optimum freeze-drying process was that the product was pre-frozen for 3 hours at -40^. The heat conducting oil was heated to OX! for 64-80 hours. The heat conducting oil was heated to \\5X. for 18-24 hours. The final product was kept at 35Ti for 6-12 hours. The contents of 141101, 141102 and 141103 samples were 101.1%, 100.8% and 100.6% respectively by high performance liquid chromatography. During the 12 months long-term test and accelerated test of 141101 and 141103 samples, the related substances increased slightly and the moisture content increased slightly under the market packaging, but all of them were within the limits, and the other indexes did not change significantly. During the 12 months long-term test and accelerated test, the moisture content of 141102 samples increased under the commercial packaging, but all of them were within the limit, and other inspection indexes did not change significantly. Conclusion The Temozolomide preparation prepared by the prescription and technology of thivS product has stable quality, good repeatability and good feasibility, which is suitable for industrial production.
[Key words] Temozolomide; Preparation process; The temperature of liquid; Carbon removal process; Freeze -drying process; Study of quality
替莫唑胺是一种新型的烷化剂类抗肿瘤药物，具 替莫唑胺由先灵葆雅公司开发，1998年首先在欧盟 有较宽的抗肿瘤谱，可口服，易于透过血脑屏障m、安 上市，丨999年经美国食品药品管理局(FDA)批准在美 全、与其他药物没有叠加毒性、可用于对亚硝基脲耐 国上市|51。主要用于治疗新诊断的多形性胶质母细胞 药的患者，目前认为脱氧核糖核酸(DNA)甲基化和错 瘤，开始与放疗联合治疗，随后作为辅助治疗；同时用 配修复失败是替莫唑胺细胞毒性的主要作用机制|M1。
于常规治疗后复发或进展的多形性胶质母细胞瘤或
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•药物研究•一
间变性星形细胞瘤^1。作为治疗脑胶质瘤的一线药 物，替莫哇胺口服制剂存在恶心、呕吐等副作用[8^1，易 导致药物吸收不全。注射剂具有剂量准确，起效快等 特点，适用于不便口服的患者。因此，开发替莫唑胺注 射剂十分必要。本研究通过处方筛选、制备工艺研究， 确定注射用替莫唑胺的处方和制备工艺，并对注射用 替莫唑胺的质量进行考察，为注射用替莫唑胺的开发 和大生产提供研究基础和依据,现报道如下。1仪器与试药
1.1仪器与设备
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处方中加人L-苏氨酸、枸橼酸制备的样品外观均 为白色疏松块状物，冻干前后pH值均未发生明显变 化；处方中枸橼酸用量为100 mg时，成品复溶时间 短、有关物质限度低及增长趋势较缓(表1)。
表1
处方
用量(mg)50
枸橼酸
外观
处方筛选考察结果
复溶时间冻干前后(min)约5约4约2约5
总杂(％)0d40^,5 d
0.2600.1900.0340.250
pH值变化
L-苏氨酸160白色疏松块状物
白色疏松块状物100白色疏松块状物150白色疏松块状物
3.51—3.50 0.0913.54—3.60 0.0683.5〇-*>3.560.0243.55—3.600.120
GYHH12型液体灌装加塞机(上海新旭发制药机 械有限公司），PZL10型轧盖机(南京博健科技有限公 司）,LYO-10型冷冻干燥机(上海东富龙科技有限公 司），Ultimate 3000高效液相色谱仪[赛默飞世尔科技 (中国）有限公司]，Aglient 1260高效液相色谱仪（安 捷伦科技有限公司），XP56电子分析天平(0.001 mg) [梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]，CPA225D电 子分析天平(0.01 mg)[赛多利斯科学仪器(北京)有限 公司]。
1.2试药
2.2制备工艺的研究
2.2.1配液温度的确定替莫唑胺溶液在低温和酸性 条件下稳定性良好;在碱性或高温条件下不稳定||2_131， 因此本研究对酸性条件、不同温度下的药液进行稳定 性考察。考察温度为40、25、15尤，考察指标为pH值、 有关物质及主药溶解时间。温度越高主药溶解时间越 短，温度越低药液的有关物质增长慢、稳定性好。因 此，配制温度控制在25T以下，放置温度控制在15尤 以下，保证大生产时主药溶解时间和药液的稳定性 (表 2)。
表2
温度m替莫啤胺(江苏奥赛康药业有限公司，批号:丨40801)， 枸橼酸(湖南华日制药有限公司，批号:20140701 )，替 奠幽妙t照品(江苏奥赛康药业有限公司，批号:140701)， 替莫唑胺杂质A工作标准品（江苏奥赛康药业有限 公司，批号:20140802)，替莫唑胺杂质B工作标准品 (江苏奥赛康药业有限公司，批号:2014091801)，替莫 唑胺杂质C工作标准品(江苏奥赛康药业有限公司，批 号:S14091101)，替莫唑胺杂质D工作标准品（北京 百灵威科技有限公司，批号:0024785 )，甲醇（强生科 技有限公司，批号：L840P51、L840P57)，己烷磺酸钠 (上海凌峰化学试剂有限公司，批号:2012022)，冰醋 酸（南京化学试剂有限公司，批号：13052310738、 13090311396 )，二甲基亚砜（南京化学试剂有限公司， 批号：150709360E)。2方法与结果
2.1处方筛选的考察
溶液稳定性试验结果
时间(h)
048
pH值
3.513.523.523.543.543.543.503.503.51
总杂(％)主药溶解时间(min)0,010.030.080.010.100.110.130.661.21
93375
15
25048
40048
2.2.2脱炭工艺的考察注射剂在配制时通常加入 0.01%~0.50%的活性炭，以达到吸附热原、杂质和色 素的作用，同时活性炭也会吸附主药,在研究过程中 要关注活性炭对药液含量的影响和对细菌内毒素指 标的控制[14~161。本研究在药液中加入0.05%、0.10%、 0.30%(W/V)的活性炭，搅拌15、30 min后进行过滤， 考察药液的性状、pH值、含量及细菌内毒素。药液中 加入不同用量活性炭处理后，外观及pH值无明显变 化，但药液含量随活性炭用量的增加而降低，工艺中 不采用脱炭工艺,安全性方面采取加强对本品原辅料 细菌内毒素的控制(表3)。
根据TEMODAR ®说明书显示制剂成品每瓶含替 莫唑胺（丨00 mg)，甘露醇(600 mg)，L-苏氨酸（160 mg)， 聚山梨醋-80( 120 mg),枸橼酸销(235 mg)，盐酸(160 mg)。 其中L-苏氨酸受美国Schering-Plough制药公司专 利™保护，因此实验中选用常规辅料枸橼酸代替L- 苏氨酸，按处方配制药液,采用盐酸调节pH值至3.0~ 4.5,灌装后进行冻干，考察性状、PH值、复溶时间和 有关物质等指标。
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中国当代医药2〇19年10月第26卷第30期
•药物研究•
表3
活性炭用量对药液影响考察结果
照了专利CN100346784C中提供的冻干工艺，同时在冻
活性炭 搅拌时间用量(％)(min)性状pH值
含量(％)细菌内毒素干曲线的制定上充分考虑处方组成、装量、容器及冻 0.00-无色澄清液体3.5499.8符合规定干机的性能，对冻干曲线三个阶段的关键参数及冻干制 0.0515无色澄清液体3.5591.4符合规定品冻融问题进行分析…'分别设计3种冻干工艺，考察 30无色澄清液体3.5592.4符合规定0.1015无色澄清液体3.5489.0符合规定制品的关键指标。冻干曲线3制备的注射用替莫哩胺 30无色澄清液体3.5489.4符合规定质量最佳，因此本品的冻干工艺为:制品预冻3 h; 0.30
15无色澄清液体3.5478.6符合规定30
无色澄清液体
3.55
79.2
符合规定
导热油升温至Ot，保温64~80 h;导热油升温至15丈， ‘-”表示无数据
保温18〜24 h;最终制品35^,保温6~12 h出箱(表4)。 2.3质量研究
2.2.3冻干工艺考察本品在进行冻干工艺研究时参
2.3.1含量测定高效液相的色谱条件与系统适用性
表4
冻干工艺考察结果
项目冻干曲线1
冻干曲线2
冻干曲线3
冻干
制品-40T，预冻3 h;导热油升至-22^， 制品-40T，预冻1 h;
制品-40尤，预冻3 h;导热油0尤，64〜80 h; 维持4 h;制品40^：，保温2 h;5t：，保温 使制品达-5T左右后再使制品温度达到
导热油15^，18〜24 h;制品35X，保温6~12 h 6h; 2丈，保温32h; 45T，保温5 h左右； -30X，保持1 h左右;制品35T：，保温
出箱
4尤，保温丨h左右；出箱
HM2 h出箱
成品特点部分样品为疏松块状物及粉末，大部分 样品为疏松块状物及粉末，少量样品样品 样品为疏松块状物及粉末，无冻融现象样品冻融冻融水分(％)1.0800.8200.370总杂质(％)
0.270
0.260
0.048
采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-己烷 表5 141101样品加速试验结果磺酸钠溶液（取己烷磺酸钠0.94 g，加0.5%冰醋酸溶 时间 水分有关物质含量(个月）性状pH值
(%)(%)(%)液溶解并稀释为960 ml，混匀，40:960)为流动相；检 0白色疏松块状物3.50.120.055101.1测波长为270 nm;柱温30尤。理论板数按替莫唑胺峰 1白色疏松块状物3.50.160.140101.8计算>6000。精密称取适量的本品内容物，用流动相 2白色疏松块状物3.50.270.040101.03白色疏松块状物3.60.250.150101.5溶解并定量稀释制成每1毫升中约含替莫唑胺0.1 mg 6
白色疏松块状物
3.5
0.30
0.130
101.1
的溶液，精密量取20 ixl注人液相色谱仪，记录色谱 图;另取替莫唑胺对照品，同法测定，按外标法以峰面 表6 141101样品长期试验结果
时间 水分有关物质含量积计算。工艺验证141丨01、141102、141103样品的含 (个月）性状pH值
(%)(%)(%)量分別为 1〇1.1%、1〇〇.8%、100.6%。
0白色疏松块状物3.50.120.055101.12.3.2稳定性考察本品模拟上市包装，对141101、 3白色疏松块状物3.50.280.060101.26白色疏松块状物3.50.260.060101.2141102、141103样品开展了（25±2代、相对湿度(RH) 9白色疏松块状物3.50.210.059101.4(60±5)%条件下的加速试验和2~8丈条件下的长期 12
白色疏松块状物
3.5
0.24
0.066
101.4
试验，考察样品性状、pH值、有关物质和含量等指 表7 141102样品加速试验结果标。141101样品在12个月长期试验、加速试验考 时间察期间，市售包装下，水分和有关物质有所增加，但 (个月）性状pH值
水分有关物质 含量(%)(%)(%)
0白色疏松块状物3.60.120.082101.8均在限度范围内，其他各考察指标均没有明显变 1白色疏松块状物3.50.160.064101.0化；141102样品在12个月长期试验、加速试验考察 2白色疏松块状物3.50.350.050101.9期间，市售包装下，水分有所增加，但均在限度范围 3白色疏松块状物3.50.280.104101.86白色疏松块状物
3.5
0.36
0.110
101.2
内，其他各考察指标均没有明显变化；141103样品 在12个月长期试验、加速试验考察期间，市售包装 3讨论
下，水分和有关物质有所增加，但均在限度范围内， 通过枸橼酸用量筛选，确定注射用替莫唑胺的处 其他各考察指标均没有明显变化(表5~10)。
方;通过考察配液温度、活性炭用量和冻干工艺，确定
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表8 141102样品长期试验结果
耐药相关性研究进展[J].医学研究杂志，2017,46(3):ll-
时间有关物质l4.
(个月）性状pH值
水分含量(%)
(%)(%)0白色疏松块状物3.60.120.082101.8[5]Cao H,Wang F,Li XJ.Future strategies on glioma research： 3白色疏松块状物3.50.200.092101.3from big data to the clinic[J].Genomics Proteomics Bioinfor6白色疏松块状物3.40.180.064101.3matics, 2017,15 (4) ： 263-265.
9白色疏松块状物3.50.250.083101.2[6】夏东彦，李英斌.替莫唑胺在脑胶质瘤联合化疗中的应用
12
白色疏松块状物
3.5
0.26
0.076
101.2
进展[J].海南医药,2017，28 (10): 1654-1656.
表9 141103样品加速试验结果
[7] 陈剑飞•口服化疗药替莫唑胺临床应用进展[j】.中外医学
时间pH值
水分有关物质含量研究,2016,14(21): 159-160.
(个月）性状(%)(%)(%)[8] 张真，崔海忠.替莫唑胺联合放射治疗复发性恶性脑胶质
0白色疏松块状物3.60.080.053101.6瘤的临床疗效[J].实用癌症杂志,2018,33(2) =211-213.
1白色疏松块状物3.50.260.041101.6肖增兵，等.早期替莫唑胺治疗在胶质母细
2白色疏松块状物3.50.280.048101.7[9j李梅，宋向奇，3白色疏松块状物3.60.220.110101.2胞瘤中应用的网状Meta分析[J].现代预防医学,2017,44
6
白色疏松块状物
3.5
0.30
0.092
101.3
(20)：3832-3836,3840,
丨1 〇1先灵公司.抗肿瘤药，特别是替莫唑胺的药物制剂，其制
表10 141103样品长期试验结果
备方法f丨丨丨丨丨途叼.中国发明专利'NlOCWAGTSlCJOfn-时间(个月）性状pH值
水分有关物质 含量(%)(%)(%)0白色疏松块状物3.60.080.053101.6[11] R.C.罗，P.J.允斯基,PJ韦勒•药用辅料手册[M]•北京:化
3白色疏松块状物3.60.160.070101.1学工业出版社，2005:184,638.
6白色疏松块状物3.50.200.049101.4[12] 郑蓉，蒋德锡身心丹，等•温度及pH对替莫唑胺溶液稳
9白色疏松块状物3.50.220.050101.6定性的影响[J].华西药学杂志,2012,27(5) :550-551.
12
白色疏松块状物
3.5
0.33
0.070
101.3
[13] Sanphui P,Babu NJ.Nangia A.Temozolomide cocrystals
with carboxamide coforraersfJJ.Crystal Growth Des,2013,13本品的制备工艺。根据确定的处方和工艺制备工艺验 (5)：2208-2219.
证样品并进行检测，研究结果显示，制备的注射用替 [14] 张大为，陈国笋,杨金志.活性炭在注射剂配制工艺中的
莫唑胺在12个月稳定性试验中质量稳定可靠，证实 应用与探讨[J].化工与医药工程，2017,38(3) :28-31.
注射用替莫唑胺的处方及制备工艺良好，可行性佳, [15淋金海，陈晓佳,丁友玲.对活性炭(供注射用）吸附液体
适于工业化生产。
中细菌内毒素能力的研究[J].上海医药，2018,39(21):
丨参考文献_|
12-15.
[1] 张垒，李延辉，姜晓东，等.替莫唑胺治疗脑肿瘤的研究进 [16] 李晓瑞，
薛彦朝，刘少琴，等.活性炭在注射液配制中对主 展[J].赤峰学院学报（自然科学版），2017,33(丨5): 66-67.
药含量的影响研究[J].亚太传统医药,2011,7(10) :73-74.[2] Wei XY,Xie CR,You CG,e^ a/.Temozolomide resistance in [17] 蔡亲.药品冻干工艺技术研究[J].技术管理，2017,（26):
high grade gliomas[J]J Shanghai Jiao Tong University( Medical 206.
Science), 2018,38 (1) ： 117-124.
[18] 滑金标,李清侠.药物冻干过程中常见问题及解决方案[J].
[3] 张文静，刘倩蓉，张敏，等.DNA损伤的修复与胶质瘤对替
海峡药学，2014,26(2) :99-100_
莫唑胺耐药性的研究进展[】].华西药学杂志,2017,32(5):
[19] 马兆堂，丁敏.浅谈药物冻干曲线的制定及常见问题分
555-558.
析[J】.当代化工研究,2017, (4): 146-147.
[4] 盛汉松,尤朝国，张弩.DNA错配修复基因与胶质瘤化疗
(收稿日期:2018-丨0-丨2本文编辑:刘克明）
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