维普资讯 http://www.cqvip.com ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２００７ ＶＯＬ．１８ ＮＯ．６ 时珍自医国药２００７年第１８卷第６期 备，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各１０１Ｍ，注入高效液 腈一水溶液（含０．３％冰乙酸、０．１％三乙胺）（２７：７３）作为流动 相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算含量。结果见表２。 相，在该色谱条件下，马来酸氯苯那敏峰形及分离度较好，且阴性 对照无干扰。 表２样品含量测定结果 ％ ３．３检测波长的选择文献 是采用２６２ ｎｍ作为检测波长，文 献 是采用２１０ ｎｍ作为检测波长，《中国药典》中马来酸氯苯那 敏片的吸收系数法采用２６４ ｎｍ作为测定波长。经ＤＡＤ检测器 分析，马来酸氯苯那敏有多个最大吸收波长，２６２ ｎｍ附近波长作 为检测波长较适宜。经２６２，２６４ ｆｉＢ比较试验，２６２ ｎｍ处的峰面 标示量％，ｒｂ＝２ 积稍大，故选择２６２ ｎｍ作为检测波长。 根据３批中试样品含量测定结果，暂定本品每片含马来酸氯 苯那敏（Ｃ】６Ｈ】９Ｃ１Ｎ２・Ｃ４Ｈ４０４）为标示量的９０．０％～１１０．０％。 ３讨论 ・ 参考文献： 国家药典委员会．中国药典，Ⅱ部［ｓ］．北京：化学工业出版社， ３．１提取方法的选择根据马来酸氯苯那敏易溶于水，乙醇。三 ［１］’２０００：４９． 氯甲烷的特点 ，分别采用盐酸溶液（取稀盐酸１ ｍｌ，加水稀释 ［２］ 国家药典委员会．中国药典，Ｉ部［ｓ］．北京：化学工业出版社， 至１００ ｍ１）、流动相［乙腈一水溶液（含０．３％冰乙酸、０．１％三乙 ２Ｏｏｏ：２９１，５３３，５６３．５７８． 胺）（２７：７３）］、９５％乙醇、５０％乙醇为提取溶媒进行筛选，经试 ［３］杨瑞瑞，刘莲英，韩昱．中药咳特灵胶囊（片）中马来酸氯苯那敏 验，不同提取溶媒测定结果基本一致，本研究参考药典方法，采用 的含量测定［Ｊ］．现代中医药，２００３，（５）：７３，７７． 盐酸溶液为提取溶媒。 ［４］池浩波，曾伟杰．ＨＰＬＣ法测定咳特灵胶囊（片）中马来酸氯苯那敏 ３．２流动相的选择文献 采用乙腈－３％冰乙酸．三乙胺（２０： 的含量［Ｊ］．广东药学，２００３，１３（４）：１９． ８０：０．０８），乙酸调ｐＨ ３．０为流动相，文献 采用乙腈－０．５％十 ［５］ 翟红，丁子杰，赵红旗，等．反相高效液相法测定咳特灵胶囊中马 来酸氯苯那敏的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００２，１３（１０）：５９５． 二烷基硫酸钠溶液一磷酸（６０：４０：０．１）为流动相，经试验采用乙 大黄治疗慢性肾功能衰竭有效成分研究 翁 涛 ，潘源虎 ，游（１．武汉生物工程学院，湖北武汉菲 ４３００６５） ４３０４１５；２．湖北中医学院药学院，湖北武汉捅要：目的对药用大黄治疗慢性肾功能衰竭的化学成分进行研究。方法应用色谱和光谱技术提取分离和鉴定大黄中 化学成分（一）一ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ一３一Ｏ—ｇａｌｌａｔｅ（ＥＧＣＧ），并通过口服给予对肾切除致肾衰鼠模型治疗，观察各组动物尿素氮和 血肌酐含量。结果ＥＧＣＧ能减低肾衰鼠模型血中尿素氮和血清肌酐水平、降低肾小球膜损伤指数，且与药剂量呈一定 量一效关系。结论药用大黄中化学成分ＥＧＣＧ能使肾的组织结构和生理功能接近正常。 关键词：大黄；肾衰竭；化学成分 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０８０５（２００７）０６．１４２７－０２ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ ｏｆ Ｉ ｕｂａｒｂ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｒｅｎａｌ Ｆａｉｌｕｒｅ ＷＥＮＧ Ｔａｏ ，ＰＡＮ Ｙｕａｎ．ｈｕ ，ＹＯＵ Ｆｅｉ （１．Ｗｕｈａｎ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｗｕｈａｎ ４３０４１５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｕｂｅｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｗｕｈａｎ ４３００６５。Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｆｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ ｏｆ ｒｈｕｂａｒｂ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏ－ ｇｒａｐｈｉｃ ａｎｄ ｓｐｅｃｔｒａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ。ｓｅｐａｒａｔｅ ａｎｄ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ ＥＧＣＧ．Ｔｒｅａｔ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｔｈｒｏｕｇｈ ｇｉｖｉｎｇ ｏｒａｌｌｙ，ｏｂｓｅｒｖｅｓ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｍｙｏ—ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｃｏｎｔｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｍｙｏ．ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ｄｅｃｒｅａｓｅ．ＥＧＣＧ ｒｅｄｕｃｄ ｔｈｅ ｒｅｎａｌ ｇｌｏｍｅｒｕｌｕｓｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄａｍａｇｅ ｉｎｄｅｘ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ ＥＧＣＧ ｏｆ ｒｈｕｂａｒｂ ｃａｎ ｐｒｏｔｅｃｔ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ ｏｒｇａｎｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｅｄｉｃａｌ ｒｈｕｂａｒｂ： Ｋｉｄｎｅｙ ｆａｉｌｕｒｅ： Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｔｉｏｎ 慢性肾功能衰竭（Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｒｅｎａｌ Ｆａｉｌｕｒｅ，ＣＲＦ）是多种肾脏疾 儿茶素一３一Ｏ一没食子酸酯（一）一ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ一３一Ｏ—ｇａｌｌａｔｅ）（ＥＧＣＧ）。 病持续进展的最终结局，而阻止其进展仍然是目前临床医生和病 本文围绕ＥＧＣＧ的提取分离、结构鉴定和抑制ＣＲＦ的初步药理 人最为关注的问题之一。对ＣＲＦ治疗主要包括肾脏替代治疗和 实验进行研究，以其为治疗慢性肾功能衰竭的中药新药研究提供 非替代治疗。目前常用透析治疗法只能延长寿命而不能从根本 依据。 上改善肾脏功能；肾移植存在费用较高，供源紧张且有排异及并 １仪器与材料 发症等问题。中药大黄及其复方制剂在临床上已广泛应用于 ＸＲＣ一１型显微熔点测定仪（温度未校正）；ＩＲ－４４０型红外光 ＣＲＦ的治疗 。它对抑制ＣＲＦ发展有确切效果 Ｊ。据相关文 谱仪；Ｖａｒｉａｎ—ＩＮＯＶＡ６００型核磁共振仪（ＴＭＳ内标）；薄层色谱硅 献报道 ，大黄中抑制ＣＲＦ的有效成分主要是（一）表没食子酰 胶和柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂生产）；Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０凝胶 （Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司生产）；其它试剂均为分析纯。ＥＧＣＧ标准品购 自ＳＩＧＭＡ公司；大黄购自湖北利川药材公司，由湖北中医学院陈 收稿日期：２００６—１１—２８；修订日期：２００７－０１—１２ 科力教授鉴定为Ｒｈｅｕｍ ｏ￣ｃｉｎａｌｅ Ｂａｉｌｌ。Ｗｉｓｔｒ纯种大鼠，普通 ａ作者简介：翁涛（１９８１一），男（汉族），湖北十堰人，现任武汉生物工程学 级，由湖北中医学院提供。ＥＧＣＧ，按文后所述方法提取制备。 院助教，学士学位，主要从事天然药物化学研究工作． ・１４２７・ 维普资讯 http://www.cqvip.com 时珍国医国药２００７年第１８卷第６期２方法与结果 ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２００７ＶＯＬ．１，８ ＮＯ ６ 肾大部分 ，残留左肾经止血处理后，缝合伤口，分笼饲养。术后 每隔１０ ｄ割尾巴取血测定尿素氮，至血中尿素氮达６２ ｎ塔时，表示 ２．１ ＥＧＣＧ的提取分离与鉴定 ２．１．１提取分离干燥大黄粗粉用２０倍量９５％乙醇室温渗漉，提 肾功能已衰竭。抽签决定分组，对照组每只喂水１０ ｍｌ／ｄ；治疗组Ｉ Ｏ ｍｇ／ｄ；治疗组Ⅱ每只喂ＥＧＣＧ ２０ ｍｇ／ｄ。 取液减压挥尽溶剂得浸膏，以４倍量水分散使混悬，再用等量醋酸 每只喂ＥＧＣＧＩ乙酯萃取５次，减压回收溶剂得到膏状物。再用水相分散后，氯仿 ２．２．１ ＥＧＣＧ对血尿素氮的影响见表ｌ。 萃取５次，水层经反复硅胶层析，以氯仿一甲醇梯度洗脱及Ｓｅｐｈａｄｅｘ ２．２．２ ＥＧＣＧ对血清肌酐的影响见表２。 ＬＨ－２０柱层析，以水一甲醇梯度洗脱得到化合物ＥＧＣＧ。 由表ｌ可以看出，随着实验时间的延长，对照组尿素氮水平逐 ２．１．２结构鉴定化合物ＥＧＣＧ：浅黄色粉末，ｍｐ２１８￣Ｃ。易溶于 渐升高；而两个治疗组则逐渐降低，至２０ ｄ时即有显著性差别。 水、甲醇等极性溶剂。ＦｅＣ１ 反应显蓝色，与对照品ＥＧＣＧ共薄 由表２可以看出，随着实验时问延长，３个组血清肌酐水平都 但是与对照品比较，到２０ ｄ时两个治疗组血清肌酐水平 层，甲苯：醋酸乙酯：甲酸（５：４：１）展开Ｒｆ值一致。 Ｈ—ＮＩ￣ＩＲ 在升高，生差异，特别在末期对照组大鼠已明显出现尿毒症症状 （Ａｃｅｔｏｎｅ—ｄ６）８：２．９５（１Ｈ，ｄ，Ｃ－４ｅ—Ｈ），３．０２（１Ｈ，ｄ，Ｃ－４ａ－Ｈ），５．１０ 已有显著ｆ治疗组仍然维持较低水平。 （１Ｈ，ｄ，Ｃ－２一ｒＩ），５．４９（１Ｈ，ｔ，，Ｃ－３－Ｈ），６．Ｏ１（１Ｈ，ｓ，Ｃ－８－Ｈ），６．０３ 时，（１Ｈ，ｓ，Ｃ－６一ｒＩ），６．６０（２Ｈ，ｓ，Ｃ－２＂－Ｈ，Ｃ－６’－Ｈ），７．Ｏ１（２Ｈ，ｓ，Ｃ－２’ ２．２．３组织病理学观察见表３。 正常大鼠的系膜细胞分布在基底膜未包裹的毛细血管之间， Ｈ．Ｃ－６＂－Ｈ）ｏ１３ Ｃ—ＮＭＲ（Ａｃｅｔｏｎｅ—ｄ６）８：２５．９７（ＣＡ），６８．６６（Ｃ３）， ７７．３９（Ｃ２），９５（Ｃ８），９５．８（Ｃ６），９８．２（ＣＩＯ），１０６（Ｃ２’，Ｃ８’）， 附着在血管壁上，其生理功能是给毛细血管起支持作用，对肾小球 １０９．２（Ｃ２ ，Ｃ６ ），１２１．１（Ｃ１ ），１３０（Ｃ１’），１３２．５（ＣＡ’）， 毛细血管壁中滤过时残留下来的物质有清除作用。肾衰大鼠系膜 １３８．１（Ｃ４”），１４５．１（Ｃ３ ，Ｃ５ ），１４５．５（Ｃ３’，Ｃ５’），１５６（Ｃ５， 细胞胞浆肿胀，滤过率低，通过毛细血管壁残留下来的物质多，需 细胞内清除的颗粒大而多，因而引起 ｃ７），１５７（Ｃ９），１６５．４（ｃ７”）。以上数据与文献报道 的波谱 要系膜细胞清除的物质也多，ｒＬ ｌ 系膜细胞损伤也大，基质呈现增生和纤维化；而治疗组则经毛细血 数据一致，故鉴定该粉末为ＥＧＣＧ。 故系膜细胞内清除的物质颗粒也 ２．２ Ｆ，Ｃ，ＣＣ，的药理实验取健康雄性大鼠２０只，腹腔注射２．５％ 管滤过而残留下来的物质较少，引起系膜细胞基质增生和纤维化也轻。 戊巴比妥麻醉。沿腹线正中线切开腹壁，做右肾全切除，再切去左 小而少，又因清除负荷轻，ｊ ｒＬ ２ ；表１ ＥＧＣＧ对肾衰鼠模型血尿素氮的影响（ ±ｓ） 与对照组比较，‘Ｐ＜０．Ｏ１ 表３组织病理学观察（ｉ±ｓ） 参考文献： 肖 炜，邓虹珠，马云，等．大黄治疗慢性肾功能衰竭的临床与实验 研究概述［Ｊ］．中国中药杂志，２００２，２７（４）：２４１． 与对照组比较， Ｐ＜０．０ｌ 黎磊石，刘志红，张景红，等．大黄延缓慢性肾衰竭的临床和实验研究 ［Ｊ］．中国中西医结合杂志，１９９１，ｌ１（７）：３９２． 张景红，黎磊石，万柏珍，等．大黄对慢性肾衰病人脂质代谢的影响 ［Ｊ］．中华肾脏病杂志，１９９３，９（３）：１３３． Ｙｏｋｏｚａｗａ Ｔ，ｅｔ ａｌ，Ｎｅｐｈｒｏｎ，１９９１，５８：１５５． ３讨论 氮代谢紊乱是ＣＲＦ患者的突出表现，大量实验和临床研究均 证明，大黄具有改善氮代谢作用 。以上实验初步做了ＥＧＣＧ对 血清肌酐和尿素氮影响的药理实验，证实其能减少血肌酐和尿素 氮的水平。 肾小球内系膜细胞增生和细胞外基质增多是肾小球硬化 过程中的主要表现，系膜细胞属于血管周细胞，是反应活跃的肾小 球固有细胞，在炎症过程中不但是被动受害者，而且是直接参与 者，通过其结构和代谢的改变直接影响炎症过程，以上实验证实， ＥＧＣＧ有保护和修复肾组织作用，减低血中尿素氮，降低血清肌 ＹｏｋｏｚａｗａＴ，ｅｔ ａ１．Ｊｐｎ．Ｎｅｐｈｒｏｎ．１９９３，３５（１）：１３． Ｅｘｐ，Ｔｏｘｉｃｏｌ ｐａｔｒｏｌ，１９９７，４９（１～２）：ｌ１７． 贾志胜，周波，杨立，等．绿茶中茶多酚的２Ｄ—ＮＭＲ研究［Ｊ］．波 谱学杂志，１９９８，１５（１）：２３． Ｓｈｅｎ ＣＣ．ｃｈａｎｇ Ｙ Ｓ，ＨＯＬＫ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．１９９３．３４：８４３． 杨俊伟，黎磊石．大黄延缓慢性肾衰发展的实验研究［Ｊ］．中华肾病 杂志，１９９３，９（２）：６５． 酐，使肾脏滤过和排泄代谢产物的功能接近正常，减少废物在体内 的潴留；废物在体内的潴留减少反过来对肾细胞的毒害和破损减 轻，从而使肾组织结构和生理功能接近正常。 黎磊石．大黄治疗慢性肾功能衰竭的疗效及其作用机理［Ｊ］．临床内 科杂志，１９９１，８（６）：１２． 蒋工伟，陈香美，黎磊石．大黄对体外肾小球系膜细胞生长的影响 ［Ｊ］．中华肾病杂志，１９９０，２（４）：３７． ・１４２８・