制剂与技术 ２０１１年１１月第１８卷第３１期 正交试验优化飞燕草总黄酮提取工艺 徐力 长春中医药大学附属医院药剂科，吉林长春１３００２１ Ｉ摘要】目的：优选飞燕草总黄酮最佳提取工艺。方法：采用正交试验优化飞燕草乙醇提取工艺条件，并利用紫外分光 光度法测定总黄酮含量。结果：正交试验确定最优提取条件，８０％乙醇提取３次，每次１．５ ｈ，乙醇用量为１０倍药材 量。结论：该正交试验优化工艺简便、可行、重现性好。 【关键词】飞燕草；总黄酮；提取；正交试验 【中图分类号］Ｒ９４３ ｆ文献标识码】Ｃ ［文章编号］１６７４—４７２１（２０１ １）１ １（ａ）一１５４—０２ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｒｏｍ ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ ＸＵ ｎ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｏｆ Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２１，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｆ ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｌｆｏｒｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｏｐｔｉ— ｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｌｏｒｕｍ，ａｎｄ ｄｅｔｅｒｆｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｔｒｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，８０％ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ，３ ｔｉｍｅｓ，１．５ ｈ，ｅｔｈａｎｏｌ ｗａｓ １０ ｔｉｍｅｓ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｆｅａｓｉｂｌｅ，ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｌｆｏｒｕｍ；Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｅｘｔｒａｃｔ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ 飞燕草（ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｌｆｏｒｕｍ）为毛茛科翠雀属的多 年生草本植物。又名大花飞燕草、千鸟草、翠雀、萝小花等，分 布于我国各地。辛，苦，温，有毒，人肺，心，胃三经。具有止咳 平喘，利水消肿，解痉止痛之功，主治喘息不得卧，水肿胀满， 腹痛，风热牙疼，头虱等症【１］。主要含有生物碱、皂苷、黄酮等 有效成分，本课题通过前期研究发现飞燕草全草中含有一定 量的黄酮．但未见对其系统性研究。故本课题以飞燕草为原 料．系统研究其所含黄酮类成分，为最终深入了解飞燕草提 供全面的科学依据。 １仪器与试药 表１因素水平 品溶液 。 ２．２．２样品溶液的制备将正交试验所得各组提取液于６０℃ 下减压回收乙醇，浓缩液置水浴锅上蒸干（６００Ｃ），干品研细， ＵＶ一１７００型紫外可见分光光度计（日本岛津），加热套， 水浴锅，真空泵，旋转蒸发仪，以上器材均为北京安捷来科学 仪器设备有限公司生产。 过６０目筛，精确称取干燥细粉２０ ｍｇ，置１００ ｍｌ容量瓶中， 加８０％乙醇７０ ｍｌ，超声溶解３０ ｒａｉｎ，放冷后加８０％乙醇定 容至刻度，滤过 续滤液作为样品溶液 。 ２．２．３显影液的制备称取１．０ ｇ硼酸和１．０ ｇ乙酸钠．置１００ ｍｌ 飞燕草（采于吉林省磐石市，经长春中医药大学邓明鲁 教授鉴定为毛莨科翠雀属的多年生草本植物飞燕草）；芦丁 （含量测定用）；其余试剂为分析纯。 ２方法 容量瓶中，加８０％乙醇定容至刻度，４℃以下保存备用 。 ２．２．４测定波长的选择取对照品溶液和供试品溶液，加３ ｍｌ 显影液，混匀后在２００～５００ ｎｍ范围内进行波长扫描，发现在 ３８５ ｎｍ处均有最大吸收峰，故选择３８５ ｎｍ为测定波长［ 。 ２．１飞燕草总黄酮的提取 精确称取飞燕草全草５００ ｇ，加入乙醚５ ０００ ｍｌ浸泡３次， 每次１．５ ｈ，脱脂ｌ２＿５】。残渣挥净乙醚．加入乙醇，采用回流提取 法提取飞燕草全草总黄酮．为了确定乙醇回流提取的最佳提 取条件，本文采用４因素３水平依正交试验表Ｌ９（３ ）进行正 交试验。考察因素：提取溶剂、提取次数、提取时间与溶剂用 量四因素。因素水平见表１。 ２．２飞燕草全草总黄酮的含量测定 ２．２．５标准曲线的绘制精密吸取芦丁对照品溶液０．１、０．２、 ０．３、０．４、０．５ ｍｌ，置ｌ０ ｍｌ容量瓶中，加３ ｍｌ显影液，加８０％乙 醇定容至刻度，以８０％乙醇为空白对照．于３８５ ｎｍ处测定吸 光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲 ２．２．１对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品２－３１ ｍｇ，置 １０ ｍｌ的容量瓶中，加８０％乙醇溶解，定容至刻度，即得对照 １５４中国当代医药ＣＨＩＮＡ ＭＯｌＤＥＲＮ ＭＥＤｌＣＩＮＥ 线，计算得回归方程Ｙ＝６７．５６Ｘ一０．０４６ ５，ｒ＝Ｏ．９９９ ８（ｎ＝５）。标 准曲线结果表明芦丁在２－３ｌ～１１．５５ Ｉｘｇ／ｍｌ范围内与吸光度 呈良好的线性关系［５－８／。 ２．２．６样品含量测定取正交试验所得样品溶液．在３８５ ｎｍ处 测定吸光度，将吸光度带入标准曲线，直线回归法计算总黄 酮含量［５－８］